牛痘病毒-拓?fù)洚悩?gòu)酶試劑該Vaccinia Virus Topoisomerase I 來源于牛痘病毒，通過基因重組方案制備純化。該TOPO酶能解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)，

此外還能識別并切割雙鏈DNA末端 [5’C(T)CCTT]，并且與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復(fù)合物。該共價復(fù)合物遇到DNA的5’

-OH基團(tuán)后，重新連接形成完整DNA鏈。因此，該TOPO 酶可作為DNA連接的有效工具酶，用于DNA的載體連接

（TOPO克隆載體制備）、接頭連接（NGS建庫）等實(shí)驗(yàn)。

組分

組分名稱數(shù)量

Vaccinia TOPO (5pmol/μl)100 μl

10×TOPO Buffer1 ml

2M NaCl1 ml

應(yīng)用

DNA-載體連接（TOPO載體制備）

接頭連接（NGS建庫）

儲存

-20℃可保存3年。

牛痘病毒-拓?fù)洚悩?gòu)酶試劑恒溫擴(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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