細胞名稱：人腦微血管內(nèi)皮細胞hCMEC/D3ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。

1、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數(shù)加倍，通常是指細胞指數(shù)或?qū)?shù)生長期。代數(shù)是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經(jīng)驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經(jīng)驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務(wù)告知書

1）細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi)，給我們提出真實的實驗結(jié)果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現(xiàn)問題時照片以及細胞相關(guān)操作的詳細步驟的，并跟技術(shù)人員溝通的，由技術(shù)人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內(nèi)，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS4846C人成纖維細胞GM00526

YS4847C人B淋巴細胞GM50152

YS4848C卵巢癌細胞caov-4

YS4849C褐家鼠腦海馬體成纖維細胞H19-7/IGF-IR

YS4850C小鼠主動脈血管平滑肌細胞MOVAS

YS4851C小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞RGC-5

YS4852C小細胞肺癌細胞DMS53

YS4853C肺間皮瘤細胞NCI-H2052

YS4854C人直腸腺癌細胞SW1463

YS4855C人表皮樣癌細胞A-431-LUC2

YS4856CIL-10報告293細胞IL-10ReporterHEK293Cells

YS4857C人肺腺癌腫瘤相關(guān)成纖維細胞HUMAN LUNG ADENOCARCINOMA CAFS

YS4858CNFAT-Luc 報告基因 T 淋巴細胞Jurkat-Lucia NFAT Cells

YS4859C牙骨質(zhì)IDG-CM6

YS4860C人B細胞淋巴瘤ri-1

YS4861C卵巢腺癌細胞EFO-27

YS4862C人多發(fā)性骨髓瘤細胞KMS-12-PE

YS4863C胰腺腺癌細胞T3M-4

YS4864C人胰腺導管癌細胞MIA PaCa-2

YS4865C成人急性髓系白血病細胞SKM-1

YS4866C小鼠淋巴母細胞b淋巴細胞TC1

YS4867C小鼠髓樣乳腺癌貼壁細胞EO771

YS4868C小鼠淋巴瘤細胞L5178YTK

YS4869C小鼠胚胎成纖維細胞3T3-swissalbino

YS4870C小鼠肥大細胞瘤細胞P815

YS4871C人黑色素瘤細胞A375.S2

YS4872C肺支氣管癌ChaGo-K-1

YS4873CRAW-Dual CellsRAW-Dual

YS4874C人前列腺癌細胞MDA-PCA-2B

YS4875C人T淋巴細胞白血病細胞C8166（C8166-CD4）

YS4876C人胚胎腎細胞293T

YS4877C小細胞肺癌細胞NCI-H889

YS4878C大鼠肺泡Ⅱ型細胞RLE-6TN

YS4879C人縱狀神經(jīng)纖維瘤細胞hTERT ipNF95.6

YS4880C人食道癌腫瘤細胞Colo680N

YS4881C口腔舌鱗狀細胞癌細胞CAL-33

YS4882C小鼠肺腺癌細胞系LA795

YS4883C腦星形細胞瘤SW1783

YS4884C小鼠T淋巴細胞CTLL-2

YS4885C人甲狀腺癌細胞ACT-1

YS4886C人肝癌細胞JHH4

YS4887C唐氏綜合癥背景羊水來源細胞GM03606

YS4888C膀胱癌細胞Ku1919

YS4889C肺癌大細胞瘤HCC1438

YS4890C人卵巢癌細胞OVCAR-8

YS4891C惡性黑色素瘤細胞Malme3M

YS4892C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞BB7.1

YS4893C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞ME 1

YS4894C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞BBM.1

YS4895C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞L243

YS4896C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞4E11

YS4897C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞BB7.7

YS4898C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞IGG-6A6

YS4899C小鼠骨髓瘤雜交瘤細胞9.3F10

YS4900C小鼠神經(jīng)干細胞NE-GFP-4C

YS4901C人成纖維細胞GM00325

YS4902C羊水衍生細胞GM02422

YS4903C小鼠胚胎瘤細胞ATDC5

YS4904C人肝細胞THLE-3

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