細胞名稱：小鼠Balb  c腦內皮瘤bEnd.5ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，zui后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？細胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細胞增殖形成匯合地單層細胞或密集地細胞懸液。根據傳統定義，*次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細胞生命周期有限，在有限的生命周期內需掌握好細胞zui大的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的*性。細胞系是不斷生長，分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。實際上，連續(xù)細胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數的增加細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經過了遺傳改造。

1、倍增和代數有什么區(qū)別？倍增是培養(yǎng)物中細胞總數加倍，通常是指細胞指數或對數生長期。代數是指細胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數，傳代培養(yǎng)的目的是使細胞處于低密度以刺激其進一步生長。

2、接收到的凍存細胞該如何處理？收到包裝箱后，立即將凍存細胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細胞儲存在-80℃，這樣會對細胞造成不可挽回的傷害。

3、有多少經驗才能開始正常人類細胞培養(yǎng)？推薦有經驗者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經驗的話對其它細胞類型也是很有利的。如果你是細胞培養(yǎng)的初學者或打算建立細胞培養(yǎng)實驗室，我們會為你提供幫助。請的細胞培養(yǎng)專家。

售后服務告知書

1）細胞出現問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS4629C人非小細胞肺癌細胞NCI-H358

YS4630C人結直腸腺癌細胞NCI-H716

YS4631C卵巢癌細胞RMGI

YS4632C多發(fā)性骨髓瘤MOLP8

YS4633C白血病細胞JJN3

YS4634C結腸癌細胞CL11

YS4635C結腸癌細胞CL-40

YS4636C人肺癌細胞NCI-H1755

YS4637C人腎上腺皮質小細胞癌細胞SW-13

YS4638C人大腸癌細胞CX-1

YS4639C 骨肉瘤細胞MNNGHOSCl #5

YS4640C人甲狀腺癌細胞C643

YS4641C小鼠腎小球系膜細胞SV40-MES-13

YS4642C宮頸腺癌細胞HeLa229

YS4643C畸胎瘤細胞NCCIT

YS4644C大鼠骨肉瘤細胞UMR-106

YS4645C人腎母細胞瘤細胞SK-NEP-1

YS4646C肺支氣管良性腫瘤NCI-H727

YS4647C人小細胞株肺癌細胞 NCI-H82

YS4648C人神經母細胞瘤細胞IMR-32

YS4649C口腔鱗狀腫瘤細胞HSC2

YS4650C乳腺癌細胞BT549

YS4651C小鼠垂體瘤細胞AtT-20

YS4652C大鼠垂體瘤細胞GH3

YS4653C大鼠神經膠質瘤細胞C6

YS4654C小鼠雜交瘤（抗CD2）細胞OKT 11

YS4655C大鼠骨骼肌成肌細胞L6

YS4656C人胃癌細胞HS746T

YS4657C小鼠胚胎肝細胞BNL CL.2

YS4658C人結腸腺癌細胞SW948

YS4659C人burkitt淋巴瘤細胞CA46

YS4660C人肺腺癌細胞Calu-1

YS4661C人T淋巴細胞瘤細胞Jurkat

YS4662C人膀胱移行細胞癌SW780

YS4663C小鼠腎腺癌細胞RenCa

YS4664C 小鼠膠質母細胞瘤細胞熒光標記GL261-Red-Fluc

YS4665C人多形性肝癌細胞SNU-387

YS4666C人肝癌細胞SNU-182

YS4667C骨髓瘤細胞KMS11

YS4668CB細胞淋巴瘤WILL-1

YS4669C人T淋巴細胞白血病細胞HuT78

YS4670CFreeStyle 293-FFreeStyle 293-F

YS4671C恒河猴胚腎細胞FRhK4

YS4672C非洲綠猴正常腎細胞Vero

YS4673C非洲綠猴腎細胞CV1

YS4674C小鼠胚胎成纖維細胞BALB3T3 clone A31

YS4675C恒河猴腎細胞LLC-MK2

YS4676C非洲綠猴腎成纖維細胞COS1

YS4677C多發(fā)性骨髓瘤細胞MM.1R

YS4678C人結直腸腺癌上皮細胞SW837

YS4679C人肺腺癌細胞HARAB

YS4680CEBV陽性棉頂狨猴淋巴細胞B958

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