細(xì)胞名稱：B10BR小鼠黑素細(xì)胞ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細(xì)胞凍存：無血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細(xì)胞密度超80%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2的比例進(jìn)行分瓶傳代(兩個T25瓶),補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細(xì)

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細(xì)胞凍存:

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉(zhuǎn)入液氮罐中。C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細(xì)胞復(fù)蘇:

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意佩戴防護(hù)面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

售后條款:

1.）細(xì)胞出現(xiàn)問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標(biāo)準(zhǔn)是什么?

1. 細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā);

2. 細(xì)胞污染問題,請在收到產(chǎn)品48小時內(nèi),給我們提出真實的實驗結(jié)果,核實后重發(fā);

3. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置24小時后,干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,(需提供真實清晰的細(xì)胞狀態(tài)照片),重發(fā);

4. 干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置4小時候并且未開封,出現(xiàn)污染,重發(fā);

5. 活率問題,請在收到產(chǎn)品7天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,核實后予重發(fā);

6. 細(xì)胞收到當(dāng)天以及第2,3天請拍照,3天未告知的,視為產(chǎn)品合格。4-7天內(nèi)出現(xiàn)問題有提供收到細(xì)胞前3天照片和細(xì)胞出現(xiàn)問題時照片以及細(xì)胞相關(guān)操作的詳細(xì)步驟的,并跟技術(shù)人員溝通的,由技術(shù)人員判定為我方責(zé)任的,重發(fā)。技術(shù)人員判定為雙方承擔(dān)責(zé)任的由雙方進(jìn)行協(xié)商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

2）.細(xì)胞出現(xiàn)問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?

1. 客戶造成細(xì)胞污染,不重發(fā);

2. 客戶不正確操作致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

3. 非本庫推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

4. 細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供細(xì)胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);

5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理的,不重發(fā);

6. 細(xì)胞收到2天內(nèi),未告知,不重發(fā);

7. 視具體情況而定。

YS2051CRASMCs大鼠氣道平滑肌細(xì)胞

YS2052CCOLO-1人角質(zhì)形成細(xì)胞

YS2053CBSC40非洲綠猴腎細(xì)胞

YS2054CHepG2.2.15穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒HepG2細(xì)胞

YS2055CGC9811-P人胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞

YS2056CrRMECs大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS2057CL-540Hodgkin人霍奇金淋巴瘤細(xì)胞

YS2058CC8166人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS2059CK7M2-WT小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞

YS2060CST2小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞

YS2061CHCCLM6人肝癌細(xì)胞

YS2062CQGY7703人肝癌細(xì)胞

YS2063CLICCF人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞

YS2064CSW1783人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS2065CLIPF178C人膽管癌細(xì)胞

YS2066CLIPF155C人膽管癌細(xì)胞

YS2067CH4IIEC3大鼠肝癌細(xì)胞

YS2068CRBSMC大鼠腦動脈平滑肌細(xì)胞

YS2069Cmelan-a鼠黑色素瘤細(xì)胞

YS2070CKYSE180人食管癌細(xì)胞

YS2071CHIBEC人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞

YS2072CBAr-T人食管上皮細(xì)胞

YS2073ChESC人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞

YS2074CCCLP1人膽管癌細(xì)胞

YS2075CSG231人膽管上皮癌細(xì)胞

YS2076ChRPE人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞

YS2077COCI-LY1人B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞

YS2078CSK-N-FI人腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

YS2079CHPMC人腹膜間皮細(xì)胞

YS2080CHut-102人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞

YS2081CCOLO-1人角質(zhì)形成層細(xì)胞

YS2082CMN60人B細(xì)胞白血病細(xì)胞

YS2083CPAa人肺腺癌細(xì)胞

YS2084CKYSE150人食管鱗癌細(xì)胞

YS2085CHEK-A人表皮角質(zhì)細(xì)胞

YS2086CU-373MG人膠質(zhì)瘤細(xì)胞

YS2087CNCI-H522[H522]人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

YS2088CMCA-205小鼠纖維肉瘤細(xì)胞

YS2089CHOSEpiC人卵巢上皮細(xì)胞

YS2090CTCMK-1小鼠腎小管上皮細(xì)胞

YS2091CSW260人結(jié)腸癌細(xì)胞

YS2092CB10BR小鼠黑素細(xì)胞

YS2093CND7/23大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

YS2094CRGCs大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞

YS2095CRPMI2650人鼻腔上皮細(xì)胞

YS2096CNCI-H69人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞

YS2097CmRTEC小鼠腎小管上皮細(xì)胞

YS2098CNb2-11小鼠淋巴瘤細(xì)胞

YS2099CH-EMC-SS人軟骨肉瘤細(xì)胞

YS2100CTFK-1人膽管癌細(xì)胞

YS2101CHRC99人直腸腺癌細(xì)胞（中分化）

YS2102CHR8348人直腸腺癌細(xì)胞（低分化）

YS2103CSTO小鼠胚胎成纖維細(xì)胞

YS2104CHCC1954人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

YS2105CHCC1954BL人外周血B細(xì)胞

YS2106CHCC1419人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞

YS2107CHPAEC人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞

YS2108CDiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞

YS2109CXWLC-05人肺腺癌細(xì)胞

YS2110CMKN-28人胃癌細(xì)胞

YS2111CWB-F344大鼠肝干細(xì)胞

YS2112ChEEC人子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞

YS2113CPG13逆轉(zhuǎn)錄病毒包被的TK-NIH3T3細(xì)胞

YS2114CHEH2人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞

YS2115CIMR-90人胚肺成纖維細(xì)胞

YS2116CSUP-T1人T淋巴母細(xì)胞瘤細(xì)胞

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