ATCC提供多種原代人上皮細胞產(chǎn)品，涵蓋支氣管、氣管、腎、前列腺、角膜等組織來源。原代上皮細胞保留了體內(nèi)組織的生理學特征，是藥物篩選、毒理學評估及疾病建模的理想體外模型，但其培養(yǎng)難度顯著高于常規(guī)細胞系，常面臨以下問題。

　　成纖維細胞過度增殖：這是原代上皮細胞培養(yǎng)中突出的問題。上皮組織取材時不可避免帶入少量結(jié)締組織成分，成纖維細胞增殖能力和粘附能力均強于上皮細胞，極易“瘋長”為優(yōu)勢細胞群，抑制上皮細胞生長。ATCC建議采用低血清或無血清培養(yǎng)基限制成纖維細胞生長，或通過降低培養(yǎng)基鈣濃度、使用選擇性抑制試劑等方式控制雜細胞比例。差速貼壁法也是有效手段，利用成纖維細胞貼壁速度快于上皮細胞的特性，短時間貼壁后轉(zhuǎn)移上清即可獲得較純的上皮細胞。

　　微生物污染風險：上皮組織直接暴露于體表或襯貼于消化道、呼吸道內(nèi)腔，組織本身攜帶病原微生物的機會較多。取材時應嚴格無菌操作，使用含較高濃度抗生素的清洗液反復沖洗組織。培養(yǎng)所用各液體均需添加抗生素，濃度可比其他組織培養(yǎng)更高。支原體污染往往難以察覺，需定期檢測。

　　貼壁與生長支持不足：上皮細胞為貼壁依賴性細胞，需依賴支持物才能生長。在培養(yǎng)器皿表面包被膠原或其他細胞外基質(zhì)成分，模擬體內(nèi)基膜結(jié)構(gòu)，有利于上皮細胞貼附和分化，使細胞極性表現(xiàn)更為明顯。培養(yǎng)基選擇上，HamF12特別適用于原代上皮細胞培養(yǎng)，與DMEM按比例混合使用效果更佳。

　　分化功能維持困難：原代上皮細胞在常規(guī)培養(yǎng)條件下易失去分化特征。ATCC研究表明，采用氣液界面培養(yǎng)模式可有效促進上皮細胞分化，形成具有成熟功能的3D模型。該體系通過讓細胞頂端暴露于空氣、基底面接觸培養(yǎng)基，模擬體內(nèi)上皮組織的真實環(huán)境，有助于維持細胞極性和屏障功能。

　　優(yōu)化策略總結(jié)：選用ATCC配套的專用培養(yǎng)基和生長添加劑是保障培養(yǎng)成功的基礎。建立標準化操作流程，控制傳代時機，避免細胞過度融合導致老化。定期觀察細胞形態(tài)，及時發(fā)現(xiàn)雜細胞污染并采取純化措施。