細(xì)胞消化的小技巧

不一定要一次把所有細(xì)胞都要消化下來！

晃動(dòng)培養(yǎng)盤并在顯微鏡下用肉眼觀察，只要70~80%細(xì)胞都收縮了或超過適合消化時(shí)間，就該終止消化反應(yīng)，如果細(xì)胞量夠即可進(jìn)行后續(xù)傳代或?qū)嶒?yàn)步驟；如果細(xì)胞量不夠，則可視情況用不含鈣、鎂離子的平衡鹽溶液清洗仍貼壁的細(xì)胞，再進(jìn)行一次消化反應(yīng)。

▲ 消化不下來的細(xì)胞（黃）請(qǐng)視情況決定是否再消化一次。

不一定要吹打成W全單細(xì)胞懸液！

一般細(xì)胞脫離培養(yǎng)底物、并經(jīng)過5~10次輕柔吹打后，會(huì)在細(xì)胞懸液里形成小規(guī)模聚集(約5~10顆細(xì)胞)，所以不需要過度延長(zhǎng)消化時(shí)間想讓細(xì)胞分離成單細(xì)胞懸液。

消化效果不佳，先提升消化液濃度、再加長(zhǎng)作用時(shí)間！

當(dāng)你選定了一種消化方式 (物理機(jī)械法除外)，發(fā)現(xiàn)效果不佳，首先應(yīng)考慮提高EDTA或胰酶濃度，效果再不佳才加長(zhǎng)消化的作用時(shí)間，避免細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間浸泡在消化液中造成的細(xì)胞膜損傷。

（一般消化液使用：0.02%~0.04% EDTA作用5-20分鐘；0.2~0.5% 胰蛋白酶作用1~5分鐘）

結(jié)語

細(xì)胞消化 ，是一個(gè)看似很簡(jiǎn)單，但是有很多技術(shù)含量的步驟。消化好壞、是否污染、有無受傷，都在這短短的五六分鐘里決定。

當(dāng)我們已經(jīng)可以順利操作細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，接下來要思考的，就是如何讓細(xì)胞長(zhǎng)得更健康、更均一、做出來的實(shí)驗(yàn)才會(huì)更好。

祝各位的細(xì)胞都顆顆透亮、粒粒分明、活力旺盛！

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